文 | 華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 陳昌福；武漢科研時(shí)代生物技術(shù)有限公司 周鑫軍 王曉娟 陸珍珠

草魚(yú)患細(xì)菌性敗血癥的癥狀,，主要特征是身體發(fā)黑,、部分鱗片松動(dòng)、脫落,，鰭條基部有出血現(xiàn)象,，部分病魚(yú)的肛門(mén)紅腫，鰓上有大量黏液并且附有污泥，出現(xiàn)狂游,、亂竄等現(xiàn)象。解剖病魚(yú)檢查,，可見(jiàn)腹腔內(nèi)有腹水,，腸道內(nèi)少有食物，腸道發(fā)紅,、腸道內(nèi)有充氣的現(xiàn)象,。

對(duì)于養(yǎng)殖草魚(yú)（Ctenopharyngodon idella）的細(xì)菌性敗血癥（bacterial septicemia），抗生素類(lèi)“國(guó)標(biāo)漁藥”的治療效果越來(lái)越差,。在我國(guó)不同的水產(chǎn)養(yǎng)殖區(qū)均屬于能引起嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失的魚(yú)類(lèi)病害,。二氧化氯作為這款水產(chǎn)常用消毒劑，對(duì)殺菌有很好的效果,。那么如何控制制劑濃度與活化時(shí)間,，殺菌才最有效？

二氧化氯制劑的濃度與活化時(shí)間對(duì)殺菌效果的影響 ▏二氧化氯試驗(yàn)④

摘要：本試驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)對(duì)嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）的殺菌效果,，評(píng)價(jià)了二氧化氯（ClO₂）制劑配制濃度與活化時(shí)間對(duì)殺菌效果的影響,。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，四川齊力綠源水處理科技有限公司生產(chǎn)的ClO₂制劑,，將配制濃度控制在8000.0mg/L,、活化時(shí)間10min的條件下，制備的ClO₂制劑溶液,，對(duì)A hydrophila顯示出了最強(qiáng)的殺菌效果,。

關(guān)鍵詞：二氧化氯制劑；活化方法,；致病菌,；殺菌效果

為了驗(yàn)證四川齊力綠源水處理科技有限公司制備的二氧化氯（ClO₂）制劑的活化濃度與時(shí)間對(duì)殺菌效果的影響，特進(jìn)行本試驗(yàn),。

01

材料與方法

1.1供試藥物

四川齊力綠源水處理科技有限公司生產(chǎn)的ClO₂制劑（批準(zhǔn)文號(hào)：川衛(wèi)消證字2019第0001號(hào),、生產(chǎn)日期20220416）作為本試驗(yàn)中的供試藥物。

1.2供試菌株及其培養(yǎng)

從患細(xì)菌性敗血癥的草魚(yú)（Ctenopharyngodon idella）體內(nèi),，分離到的致病性嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）菌株作本試驗(yàn)的供試菌株,。將冷凍保存菌株接種在腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基（BHIA，Difco）上,，28℃培養(yǎng)24 h,，以滅菌生理鹽水洗下菌苔，離心集菌,，并用滅菌生理鹽水將濃度調(diào)節(jié)為1×10⁷cfu/mL,，低溫保存?zhèn)溆谩?/span>

1.3ClO₂制劑的配制方法

在配制ClO₂制劑溶液前打開(kāi)包裝袋，從同一個(gè)包裝袋中準(zhǔn)確稱取ClO₂制劑若干，分別溶解于3個(gè)盛有100.0mL蒸餾水的玻璃燒杯中,，輕輕攪動(dòng)使ClO₂制劑充分溶解,，制備成終濃度為2000.0mg/L、4000.0mg/L和8000.0mg/L的3個(gè)不同濃度的ClO₂制劑供試原液,。

自ClO₂制劑加入蒸餾水中開(kāi)始計(jì)時(shí),，于活化10min、20min和30min后,，分別從不同濃度的ClO₂制劑供試原液中,，定量取樣做殺菌試驗(yàn)。

1.4 殺菌處理

從位于武漢市新洲區(qū)汪集鎮(zhèn)的孟斌魚(yú)苗孵化場(chǎng)蓄水池取水（圖1）,。將取回的池水在每個(gè)容量為250.0mL的三角玻璃燒杯中,，分別盛裝100.0mL的滅菌池塘水（圖2）。

圖1示從水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)蓄水池中養(yǎng)殖池水的情景

圖2示將養(yǎng)殖池塘水定量分裝在三角玻璃燒杯中的情景

經(jīng)過(guò)高壓滅菌后（圖3）,，將其移出高壓滅菌鍋并置于超凈工作臺(tái)上（圖4）,，在無(wú)菌條件下，向每個(gè)三角玻璃燒瓶中添加1.0 mL菌濃度約為1×10⁷cfu/mL的A.hydrophila活菌液（圖5）,，輕輕搖動(dòng)三角玻璃燒瓶,，使菌液在三角玻璃燒杯瓶中分布均勻。

圖3示將養(yǎng)殖池水經(jīng)過(guò)高壓滅菌的情景

圖4示將滅菌后的三角玻璃燒瓶中置于超凈工作臺(tái)中的情景

分別從不同濃度的ClO₂制劑原液中定時(shí),、定量取樣,，添加在盛有100.0mL滅菌池塘水的三角玻璃燒瓶中，使水體中的ClO₂制劑的終濃度分別達(dá)到0.10mg/L,，0.30mg/L,，0.60mg/L和0.90mg/L。輕搖動(dòng)添加ClO2制劑原液后的三角玻璃燒瓶,，使菌體和藥液均勻地分布在水中,。另外設(shè)置添加菌液但不添加ClO₂制劑原液的三角燒瓶作為對(duì)照組。添加藥液結(jié)束40 min后,，檢測(cè)不同濃度ClO₂制劑的殺菌效果,。

圖5示向盛有滅菌池水的三角玻璃燒杯中定量添加致病菌的情景

1.5 殺菌效果的檢測(cè)

在無(wú)菌條件下，從各三角玻璃燒瓶中取0.10mL水,，塗抹在用BHIA制備的平板上,，在28℃條件下培養(yǎng)48 h后，通過(guò)計(jì)數(shù)各平皿中的菌落數(shù)量,，根據(jù)菌落的生成狀況,，判斷ClO₂制劑的殺菌菌效果。

02

結(jié)果

采用不同的濃度與活化時(shí)間制備的ClO₂制劑溶液,，對(duì)A.hydrophila殺菌效果的影響見(jiàn)圖6,。由圖6所示結(jié)果可以看出,，在配制ClO₂制劑溶液時(shí)，濃度與活化時(shí)間均對(duì)配制ClO₂制劑溶液的殺菌效果有影響的,。在本試驗(yàn)中,，在ClO₂制劑溶液起始濃度為8000.0mg/L以內(nèi)，配制濃度越大,，殺菌效果越好,。而將ClO₂制劑添加在水體中后的活化時(shí)間，在這次試驗(yàn)中控制的3個(gè)活化時(shí)間,，以將活化時(shí)間控制在10min的ClO₂制劑溶液殺菌效果最好。

圖6 配制ClO₂制劑的濃度與活化時(shí)間對(duì)殺菌效果的影響

03

討論

眾所周知,，ClO₂是一種黃綠色到橙黃色的氣體,，是國(guó)際上公認(rèn)為安全、無(wú)毒的綠色消毒劑,。ClO₂常態(tài)為氣態(tài),，沸點(diǎn)11℃。當(dāng)濃度很高時(shí)呈紅黃色,，低濃度時(shí)呈黃綠色,，是一種具有強(qiáng)烈刺激性臭味的氣體，有類(lèi)似氯氣和硝酸的特殊刺激臭味,。在-59℃時(shí)凝固成橙紅色晶體,。

ClO₂能與許多化學(xué)物質(zhì)發(fā)生爆炸性反應(yīng)。尤其是對(duì)熱,、震動(dòng),、撞擊和摩擦相當(dāng)敏感，極易分解發(fā)生爆炸,。受熱和受光照或遇有機(jī)物等能促進(jìn)氧化作用的物質(zhì)時(shí),，能促進(jìn)分解并易引起爆炸。氣相濃度超過(guò)10%則會(huì)發(fā)生爆炸,，若用空氣,、二氧化碳、氮?dú)獾榷栊詺怏w稀釋時(shí),，爆炸性則會(huì)有所降低,。正是因?yàn)镃lO2具有這些特點(diǎn)，自人類(lèi)發(fā)現(xiàn)ClO₂后的較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi),，并沒(méi)有將其作為商品開(kāi)發(fā)應(yīng)用,。而之所以沒(méi)有作為商品開(kāi)發(fā)應(yīng)用，主要是因?yàn)?span style="color: rgb(0, 0, 0);font-size: 16px;caret-color: rgba(0, 0, 0, 0);letter-spacing: 0.54px;background-color: rgb(255, 255, 255);text-align: center;font-family: 宋體;">ClO₂不能作為直接運(yùn)輸?shù)纳唐?，迄今為止,，也只能將其制備?span style="color: rgb(0, 0, 0);font-size: 16px;caret-color: rgba(0, 0, 0, 0);letter-spacing: 0.54px;background-color: rgb(255, 255, 255);text-align: center;font-family: 宋體;">ClO₂制劑的商品形式,，需要應(yīng)用時(shí)將其在現(xiàn)場(chǎng)發(fā)生后再使用。

現(xiàn)在我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖用投入品市場(chǎng)上,，用作水產(chǎn)用消毒劑的ClO₂制劑有很多,，由于制售ClO₂制劑的企業(yè)，可能是采用不同的配方制備的ClO₂制劑,，因此,，在我們利用從水產(chǎn)養(yǎng)殖用投入品市場(chǎng)上，隨機(jī)采購(gòu)的多種ClO₂制劑完成的殺菌試驗(yàn)結(jié)果證明,，市售各種ClO₂制劑對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物致病菌的殺菌效果是存在巨大差異的,。而本試驗(yàn)結(jié)果證明了，即使是同一種ClO₂制劑,，配制時(shí)的濃度以及活化時(shí)間不同,，配制而成的ClO₂制劑溶液殺菌效果也是存在明顯差異的。本試驗(yàn)結(jié)果對(duì)ClO₂制劑制售企業(yè)給予的提示,，ClO₂制劑制售企業(yè)在向市場(chǎng)推出ClO₂制劑之前,，有必要完成ClO₂制劑配制濃度、活化時(shí)間與殺菌效果相關(guān)性試驗(yàn),，并且根據(jù)效果試驗(yàn)結(jié)果,，在其產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中詳細(xì)地寫(xiě)出該產(chǎn)品的使用方法。